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H9C2大鼠心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
更新時間:2024-06-26
訪問量:1012
廠商性質(zhì):代理商
生產(chǎn)地址:美國
一、H9C2大鼠心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品說明:
1、產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
2、包裝規(guī)格
貨號:AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150
規(guī)格:0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml
3、儲存條件
常溫運(yùn)輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。
二、H9C2大鼠心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效果
轉(zhuǎn)染條件
培養(yǎng)板:24孔板
轉(zhuǎn)染試劑用量:2ul
轉(zhuǎn)染試劑:Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染時間:24小時
血清:Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清
細(xì)胞凍存:CE70100T無血清細(xì)胞凍存液
三、使用說明:
1、材料準(zhǔn)備
RNA 濃度 20 uM /L
質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素 )
2、操作步驟
提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。
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