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小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒
更新時間:2024-06-26
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廠商性質(zhì):代理商
生產(chǎn)地址:中國
小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品說明
貨號:MM-0074M1、MM-0074M2
規(guī)格:96T、48T
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于 10%和 10% 。
檢測范圍:
7.5 ng/mL - 240 ng/mL
靈敏度:
最小低檢測濃度小于 1.0 ng/mL
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存: 2-8℃。
2.有效期: 6 個月
二、實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平。用純化的小鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入小鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP),再與 HRP 標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng) 過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠 C-反應(yīng)蛋白(CRP)含量。
三、小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒組成:
注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:240、120、60、30、15、0 ng/mL.
四、樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收 集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次 離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過 程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液, 細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離 心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
五、操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
5. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘.
8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
六、注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
溫馨提示:
本產(chǎn)品提供代測服務(wù),凡購買本公司ELISA試劑盒的客戶,均可享受免費的ELISA代測服務(wù)。詳情可詢我司在線客服和經(jīng)理!