一、背景介紹

克隆形成實(shí)驗(yàn)是研究細(xì)胞存活率并探討單個細(xì)胞增殖潛能的有效方法之一。即在體外培養(yǎng)環(huán)境下，通過使單個細(xì)胞經(jīng)過連續(xù)分裂增殖至少6代，形成的細(xì)胞集群被稱為克隆或集落。每個克隆的尺寸通常在0.3-1.0mm之間，含有50個以上的細(xì)胞。通過計(jì)算克隆形成率，能夠?qū)蝹€細(xì)胞的增殖潛力進(jìn)行量化分析。

用途：

（1）評估細(xì)胞增殖能力：克隆形成實(shí)驗(yàn)可以幫助研究人員評估細(xì)胞的增殖潛力。通過觀察和計(jì)數(shù)形成的獨(dú)立克隆，可以了解細(xì)胞在體外環(huán)境中的增殖速率和能力。

(2)研究細(xì)胞群體依賴性：克隆形成實(shí)驗(yàn)有助于了解細(xì)胞的群體依賴性，即細(xì)胞是否需要相互合作形成克隆。這對于理解細(xì)胞群體內(nèi)的相互作用和細(xì)胞信號傳導(dǎo)至關(guān)重要。

(3)篩選藥物和治療方案：克隆形成實(shí)驗(yàn)可用于評估藥物對細(xì)胞增殖的影響。通過在實(shí)驗(yàn)前后比較克隆形成率，研究人員可以評估潛在藥物或治療方案的療效。

常用的手段有兩個：

①平板克隆形成實(shí)驗(yàn)：通過將細(xì)胞培養(yǎng)于培養(yǎng)基中，主要適用于貼壁生長的細(xì)胞，以評估細(xì)胞的克隆形成能力。

②軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)：通過將細(xì)胞懸浮于含瓊脂糖的培養(yǎng)基中，主要用于評估貼壁和懸浮的腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的克隆形成潛能。

二、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟

(1) 從細(xì)胞處于對數(shù)生長期狀態(tài)開始，通過胰酶消化將細(xì)胞懸浮于血清培養(yǎng)基中，并進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)；

(2) 在每個實(shí)驗(yàn)組中，控制細(xì)胞數(shù)量在400-1,000個細(xì)胞/孔的范圍內(nèi)（對于不同的細(xì)胞類型，需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定最佳細(xì)胞數(shù)量），并接種于6孔板；

(3) 持續(xù)培養(yǎng)至14天，或直到大多數(shù)單個克隆中的細(xì)胞數(shù)超過50個。在培養(yǎng)過程中，每隔3天更換培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞狀態(tài)；

(4) 克隆形成完成后，使用1 mL 4%多聚甲醛進(jìn)行細(xì)胞固定，固定時間為15-30分鐘。最后，用PBS洗滌；

(5) 向每個孔中加入1 mL結(jié)晶紫染液，染色時間控制在10-20分鐘內(nèi)；

(6) 利用PBS進(jìn)行多次細(xì)胞洗滌，進(jìn)行拍照（分別對整個六孔板及每個孔進(jìn)行單獨(dú)拍照）。

注意：本實(shí)驗(yàn)的成功關(guān)鍵在于細(xì)胞懸液的制備和適度的接種密度，務(wù)必確保細(xì)胞均勻分散，防止細(xì)胞團(tuán)的形成，并謹(jǐn)慎確保接種密度不過于密集。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)。