-
膠原酶解離組織
發(fā)布時間： 2022-12-07 點擊次數(shù)： 831次原理
切碎的組織放于含有膠原酶的完-全培養(yǎng)基中孵育，組織分解后，通過離心去除膠原酶，高濃度接種、培養(yǎng)。
材料與儀器
膠原酶 DBSS
培養(yǎng)基 移液器 皮氏平皿 培養(yǎng)瓶 離心管 手術(shù)刀 離心機步驟
1. 將組織移人新鮮、無菌的 DBSS 中，淸洗。
2. 轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)皿（9 cm 皮氏平皿，非組織培養(yǎng)級別），切除多余組織，如脂肪或壞死組織。
3. 將組織轉(zhuǎn)移至第三個平皿中，用交叉的手術(shù)刀細切成大約 1 mm3 大小。
4. 用 10~20 ml 廣口移液管將組織移入 15 ml 或 25 ml 無菌離心管或常用的容器， 中（先用 DBSS 濕潤移液管，否則組織塊易貼壁）。
5. 讓組織塊沉降。
6. 用 DBSS 重懸清洗組織，組織塊沉降后，去除上清液，重復此步驟兩次以上。
7. 將 20~30 個組織塊接種于一個 25 cm2 的培養(yǎng)瓶中，另一瓶中接種 100~200 塊。
8. 吸凈 DBSS，每瓶中加入 4.5 ml 含血清的培養(yǎng)基（如 DMEM/F12加10 % 胎牛血清）。
9. 加入 0.5 ml 粗制膠原酶（2000 U/ml，Worthington CLS 或 Sigma 1A），終濃度為 200 U/ml。
10. 于 37°C 培養(yǎng) 4~48 h，無需振蕩。腫瘤組織（如乳腺或結(jié)腸的硬癌）由于分解較慢，可作用 5 天或更長時間。有時由于時間過長 pH 過度下降（pH<6. 5），要將組織離心并用新的培養(yǎng)基和膠原酶重懸。
11. 輕輕晃動培養(yǎng)瓶檢查分離情況：組織塊呈點狀分布于培養(yǎng)瓶底部，適當吸打后分散成單一細胞或小的組織塊。
12. 有些組織（肺、腎、結(jié)腸或乳腺癌）的部分上皮細胞小團塊對膠原酶耐受，沉淀 2 min 即可與其他剩余組織分離。若將其用 DBSS 重懸，沉淀后將沉淀物接種于培養(yǎng)基中，將形成生長旺盛的上皮細胞島。上皮細胞往往在未完-全解離時存活較好。
13. 完-全分解或組織塊沉降后，收集上清液中的細胞，于 50~100g 離心 3 min（離心管或常規(guī)容器，15~50 ml，依據(jù)處理組織的量而選擇） 。
14. 去除 DBSS 或培養(yǎng)基上清液，重懸，加入 5 ml 培養(yǎng)基，接種于 25 cm2 培養(yǎng)瓶中。若膠原酶作用時 pH 下降了（pH< 6.5 達 48 h )，去除膠原酶后用 2 倍或 3 倍培養(yǎng)基稀釋細胞懸液。
15. 于 48 h 后更換培養(yǎng)基。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)
- 下一篇：口腔角質(zhì)形成細胞
- 上一篇：角膜上皮細胞培養(yǎng)實驗
銷售熱線
產(chǎn)品中心
Products
技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 地址：深圳市寶安區(qū)新安街道寶民社區(qū)創(chuàng)業(yè)二路5號建設銀行樓創(chuàng)業(yè)二路5-1 管理登陸 sitemap.xml
微信二維碼
