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    BV2細(xì)胞異常生長(zhǎng)形態(tài)解析及解決方案

    發(fā)布時(shí)間: 2022-01-06  點(diǎn)擊次數(shù): 4170次

    BV2

    常用的小膠質(zhì)細(xì)胞模型,它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒(J2)感染原代小膠質(zhì)細(xì)胞而獲得永生化。BV2細(xì)胞表達(dá)非特異性酯酶活性,它具有吞噬性能力,并缺乏過(guò)氧化物酶活性。這種細(xì)胞不僅會(huì)分泌溶菌酶,在適當(dāng)?shù)拇碳は?,還會(huì)分泌白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子。


    此外,BV2細(xì)胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性,用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。



    從表型上看,BV2細(xì)胞對(duì)MAC1和MAC2抗原呈陽(yáng)性,而對(duì)MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和半乳糖核苷(GC)抗原呈陰性[1]。

    圖片

    圖A. BV2細(xì)胞顯微照片,bar=30 μm.

    圖B. 通過(guò)掃描電鏡觀察,在玻璃蓋板上培養(yǎng)的BV2細(xì)胞,bar=5 μm.

    圖C. 通過(guò)透射電鏡觀察,BV2細(xì)胞的部分細(xì)胞質(zhì)吞噬iCA,bar=3 μm.

    (圖片引用自文獻(xiàn)[1]


    在培養(yǎng)BV2細(xì)胞的時(shí)候,同學(xué)們最常遇到的問題就是生長(zhǎng)形態(tài)異常。生長(zhǎng)形態(tài)異常往往伴隨著細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞死亡等,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)做不出結(jié)果,給大家?guī)?lái)重重困擾。


    小普根據(jù)多年的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),為大家整理了這一現(xiàn)象可能發(fā)生的原因,及相應(yīng)解決方案。


    首先我們來(lái)看看正常的BV2形態(tài)。結(jié)合眾多文獻(xiàn)和Procell的細(xì)胞圖片來(lái)看,BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞,它的形態(tài)并不規(guī)則,存在圓形和梭形兩種。


    懸浮細(xì)胞為圓形,貼壁細(xì)胞既有圓形也有梭形。由于圓形細(xì)胞折光率高,它的邊緣看起來(lái)是發(fā)亮的;梭形細(xì)胞則向兩端伸出黑色突起。

    圖片

    (圖片源自Procell)


    那么,異常生長(zhǎng)的BV2細(xì)胞有哪些形態(tài)呢?


    如何根據(jù)不同的異常生長(zhǎng)形態(tài),調(diào)整改善培養(yǎng)條件,及時(shí)解決問題?


    小普總結(jié)如下:


    圖片

    形態(tài)1:細(xì)胞全部飄起,*不貼壁

    解析:分為培養(yǎng)基偏堿及復(fù)蘇后不貼壁兩種情況。

    (1)培養(yǎng)基偏堿。培養(yǎng)瓶不透氣或者開封時(shí)間過(guò)長(zhǎng),培養(yǎng)基PH將增大,可見培養(yǎng)基呈紫紅色。BV2對(duì)培養(yǎng)基酸堿度較為敏感,在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后將會(huì)全部飄起。

    解決方案:給細(xì)胞上新鮮配制的培養(yǎng)基,并使用透氣瓶。

    (2)復(fù)蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復(fù)蘇操作過(guò)程,以及培養(yǎng)基是否存在問題。

    解決方案:確保凍存前狀態(tài)良好及凍存復(fù)蘇操作規(guī)范,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,即可解決問題。


    圖片

    形態(tài)2:細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/strong>

    解析:小膠質(zhì)細(xì)胞是一種可塑性*的細(xì)胞,可通過(guò)特定因素激活,從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過(guò)程中,小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。


    實(shí)驗(yàn)中常用細(xì)菌脂多糖(LPS)和干擾素-γ(IFNγ),分別模擬細(xì)菌和病毒感染,來(lái)刺激小膠質(zhì)細(xì)胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞突起縮短變厚,胞體增大,呈現(xiàn)阿米巴樣(如下圖所示)。


    但有的時(shí)候BV2形態(tài)變化并不明顯,還需要結(jié)合其他實(shí)驗(yàn),如檢測(cè)NO、IL-13等炎癥因子的表達(dá),來(lái)確定BV2是否被定向激活。

    圖片

    (圖片引用自文獻(xiàn)[2]


    如果細(xì)胞沒有受到任何刺激,就已經(jīng)呈現(xiàn)阿米巴樣,或者受刺激后,炎癥因子表達(dá)沒有差異,那么細(xì)胞有可能發(fā)生了自分化。


    其原因可以從以下幾點(diǎn)考慮:

    (1)存在潛在微生物污染,刺激細(xì)胞自分化。

    解決方案:通過(guò)去掉培養(yǎng)基中的抗生素確定污染類型,并排查污染源頭。

    (2)使用的胎牛血清內(nèi)毒素高,內(nèi)毒素刺激細(xì)胞自分化。

    解決方案:嘗試使用超低內(nèi)毒素胎牛血清,或許能得到改善。


    圖片

    形態(tài)3:全都是分枝狀細(xì)胞,圓形細(xì)胞少

    解析:這種形態(tài)往往伴隨著細(xì)胞生長(zhǎng)慢或生長(zhǎng)停滯的情況。由于圓形細(xì)胞增殖速度較快,在圓形細(xì)胞缺失的狀況下,整體增殖速度就會(huì)減慢。

    解決方案:由于BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞,貼壁和懸浮細(xì)胞的比例并不固定,當(dāng)懸浮細(xì)胞較多時(shí),換液和傳代時(shí)要將懸浮細(xì)胞收集,避免圓形細(xì)胞的大量損失。


    總而言之,BV2細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與其生長(zhǎng)環(huán)境息息相關(guān),給細(xì)胞以最合適的環(huán)境,嚴(yán)格按照要求規(guī)范操作,細(xì)胞也將用好的狀態(tài)回報(bào)你。


    參考文獻(xiàn):

    [1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.

    Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.

    Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.

    J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)

    [2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.

    Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.

    Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells. 



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