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如何養(yǎng)好SH-SY5Y細胞？

發(fā)布時間： 2021-12-03　　點擊次數(shù)： 1555次

SH-SY5Y細胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。

如今，SH-SY5Y細胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細胞系之一了。

但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細胞的過程中，總會遇到各種問題。今天，小編來為大家一一解答。

SH-SY5Y細胞基本信息

細胞名稱	SH-SY5Y (人神經(jīng)母細胞瘤細胞)
細胞別稱	SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y
種屬及來源	人（女性，4歲）腦神經(jīng)母細胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓
生長特性	半貼半懸
生長形態(tài)	上皮細胞樣
生長培養(yǎng)基	MEM/F12＋15% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境	氣相:95%空氣,5%CO₂溫度:37℃
推薦傳代比例	1：3-1：4
推薦換液頻率	48小時/次
凍存液配方	55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO

SH-SY5Y細胞培養(yǎng)常見問題及解決方案

收貨篇

常溫運輸過程中，細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團甚至脫落的現(xiàn)象。

遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細胞就能恢復(fù)正常生長。

收貨時皺縮

常溫細胞收貨后，把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時即可。

如果4小時后細胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過夜（過夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。

收貨時聚團

常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)，再進行傳代。

傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

收貨時脫落

常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。

脫落后的細胞通常聚團漂浮，通過離心將漂浮的細胞團收集起來，在離心管里進行胰酶消化后重新鋪板即可。

貼壁細胞常規(guī)方法消化下來，和處理好的脫落細胞合并，混勻后鋪板。

收貨脫落處理步驟

① 1200rpm（約250g）3min離心收集細胞，去除舊培養(yǎng)基；

② PBS 重懸細胞，再次 1200rpm（約250g）3min離心，去除PBS；

③ 加入 1mL 左右 0.25%胰酶重懸細胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；

④ 放入培養(yǎng)箱約 1-3min；

⑤ 用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散；

⑥ 迅速加入 3-5mL 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化；

⑦ 1200rpm（約250g）3min離心，去除胰酶；

⑧ 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無菌培養(yǎng)器皿中。

▲ 收貨時皺縮、脫落

▲ 處理后第三天

培養(yǎng)篇

SH-SY5Y細胞生長較緩慢。在培養(yǎng)過程中，有以下幾點需要注意。

能否使用DMEM/F12

MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y，并且都有相應(yīng)的文獻支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的形態(tài)會有細微差異。

另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細胞生長狀態(tài)。

培養(yǎng)基容易變黃

因其神經(jīng)母細胞瘤的特性，SH-SY5Y細胞成簇生長，飽和密度大。

有時顯微鏡下看著密度不高，但細胞簇實際密度大，所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時候，需及時換液。

生長異常緩慢

當(dāng)細胞培養(yǎng)一周都無法傳代時，可以將細胞消化下來，接種到更小的容器中，人為增加細胞密度，從而促進細胞生長。

平時傳代時也要注意接種密度不能太低。

傳代注意事項

不建議連續(xù)消化細胞，連續(xù)消化細胞會導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差。

傳代時消化時間不宜過長，通常1-3min即可，若細胞解離太快可適當(dāng)用PBS稀釋胰酶。

吹打細胞時，動作輕緩一些，減少對細胞的物理刺激。

▲ SH-SY5Y正常生長照片

形態(tài)篇

SH-SY5Y細胞培養(yǎng)時，貼壁細胞和懸浮細胞同時存在，貼壁細胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團。

懸浮細胞過多

有文獻報道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長。

SH-SY5Y生長時，大部分為貼壁細胞，少量為懸浮細胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細胞，就需要引起注意了。

處理辦法

? 換液時將懸浮細胞離心收集，新鮮培養(yǎng)基重懸后接種回原瓶/原皿。

? 當(dāng)貼壁細胞生長狀態(tài)良好、密度適中時，可以舍棄懸浮細胞。

成團嚴重

另外，SH-SY5Y細胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團現(xiàn)象。

一個視野下，有少量成團現(xiàn)象，無需特殊處理。成團嚴重，幾乎沒有鋪展開的細胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開時，就需要按以下方法特殊處理一下了。

▲ 成團較嚴重的SH-SY5Y細胞

處理辦法

方法一： 低密度接種，用胰蛋白酶消化細胞（不超過5min），按1：6比例傳代接種，并換新的培養(yǎng)器皿。延長換液時間，3天換液一次，防止細胞脫落。

方法二： 使用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)器皿，以加快細胞貼壁速度，降低細胞聚集成團的幾率。

方法三：重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，并加大血清比例（不超過20%）。

方法四：接種時，減少培養(yǎng)基量（如T25加3mL）以加快細胞貼壁速度，等待細胞貼壁后（約8-12小時），再補加培養(yǎng)基。

預(yù)防成團的方法

? 控制細胞密度不超過80%，當(dāng)密度到達或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細胞造成機械刺激。

? 使用質(zhì)量好的培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對細胞的刺激。

? 請勿頻繁把細胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37度預(yù)熱，以避免溫差對細胞造成刺激。

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